| 1. 取1-5mL过夜培养的菌液于2-4mL离心管中，12,000rpm离心1min管底部可见菌快，尽量去除上清。(菌液较多时，可以多次离心收集菌体于一个离心管中多次离心，累积菌体沉淀物一并抽提) |
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2. 向离心管中加入200ul溶液B1，用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮菌块。
 未彻底悬浮的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 |
3. 向离心管中加入250ul溶液B2，立即轻柔颠倒离心管5～7次，混匀溶液至溶液透明粘稠。
动作须温和，不可剧烈，每一管裂解时间不宜超过3min。 |
4. 向离心管中加入350ul溶液B3，立即温和颠倒离心管数次至出现大量白色絮状沉淀后，12,000rpm离心15分钟。
B3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。上清中有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 |
| 5. 小心将上清倒入或用移液器转移至吸附柱中(尽量不要吸入沉淀杂质)，室温放置1-2分钟，10,000rpm离心1min。倒掉收集管中的废液，将吸附柱重放回收集管中。 |
| 6. 向吸附柱中加入550ul溶液W于离心吸附柱中，10,000rpm离心1min，倒掉废液收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 7. 重复步骤6一次。倒掉废液后，将吸附柱重新放回收集管中， 10,000rpm离心2分钟，尽量除去残留的溶液W。 |
8. 小心取出吸附柱，将其套入一个干净的1.5ml离心管中，在吸附柱的膜中央部加入50ul溶液TE或者是灭菌水。室温放置2min后，13000rpm离心2min。
为了增加回收率，可以将TE或者是灭菌水在55度预热后洗脱。
若提取质粒测序，用30μL灭菌水洗脱，可以满足一般测序要求。 |
| 9. 取洗脱的质粒溶液2ul，跑1.0％琼脂糖凝胶电泳以及酶切检测。 |
试验操作流程图